gtag('config', 'UA-105996004-1'); . Диагностика отравления собак изониазидом в ветеринарных лабораториях. * Юрист о домашних животных

Диагностика отравления собак изониазидом в ветеринарных лабораториях.

 

См. также первод с английского «Отравления изниазидом у собак»

 

Введение. Данный вид исследований достаточно актуален в связи с тем, что уже несколько лет бродячих и декоративных собак травят лекарством от туберкулеза под названием «Тубазид». Например, в Донецкой и Луганской областях (2009 г.) были зарегистрированы массовые случаи отравления собак изониазидом [2, 4, 5, 7].
Химическая формула изониазида – C6H7N3О. Обладает выраженным бактерицидным действием, главным образом, по отношению к быстро пролиферирующим популяциям микобактерий туберкулеза. Подавляет синтез миколевой кислоты, которая необходима для образования клеточной стенки микобактерий.
Препарат хорошо всасывается в пищеварительном тракте, при даче перроральным путем бактериостатическая концентрация в крови создается через 1–3 ч после приема и сохраняется в течение 6–24 ч. Проникает через гематоэнцефалический барьер; выводится из организма преимущественно почками [9].
Перроральная передозировка этого вещества приводит к серьезным отравлениям вплоть до летального исхода. Особенно препарат высокотоксичен для собак (LD50 – 50 мг/кг живой массы) и кошек. Одна таблетка 300 мг способна привести к смертельному отравлению центральной нервной системы собаки. Грызуны относительно более устойчивы к токсическому действию изониазида. Наиболее частые случаи отравления связаны со случайным приемом препарата изониазида, который можно использовать для лечения актиномикоза крупного рогатого скота, однако на современном этапе для лечения мясо-молочного скота употребления препарата не разрешено ветфармбиосоветом Департамента ветеринарии Минсельхозпрода РФ. Препарат неэффективен для лечения хронического гранулематозного энтерита крупного рогатого скота [6, 8].
Побочное действие изониазида в первую очередь отмечается со стороны пищеварительной системы: рвота, диарея, боли в животе; полиневриты, невриты и атрофия зрительного нерва, мышечные подергивания, атаксия, ступор, судороги, лихорадка, кожная сыпь, гепатиты, метгемоглобинемия, агранулоцитоз,  эозинофилия, желтуха, пеллагра, васкулит, анемия. Может отмечаться нарушение функции печени (особенно у животных с гипотрофией или предшествующими заболеваниями печени). Со стороны периферической нервной системы возможно развитие периферической невропатии (особенно у взрослых животных и у молодняка с гипотрофией). Передозировку ГИНК следует подозревать во всех случаях, не объяснимых иными причинами метаболического ацидоза и судорог [3, 9].
Материалы и методы исследований. В химико-токсикологическом отделе Красноярской краевой ветеринарной лаборатории зарегистрирован (2010 г.) случай отравления собаки изониазидом.
Анамнез: кобель породы цверкшнауцер в возрасте 8 мес. вернулся с прогулки и через 15–20 мин у  него появились признаки болезни: сильная рвота, судороги, гиперсаливация, непроизвольная дефекация и мочеотделение. Владелец собаки обратился в ветеринарную клинику, где было проведена дезинтоксикационная и симптоматическая терапия (реланиум, магния сульфат, дексаметазон и лазикс) 10]. Однако, несмотря на лечение, смерть животного наступила в течение часа.
Труп собаки был доставлен в Краевую ветеринарную лабораторию для установления причины смерти. При вскрытии наблюдалась следующая патологоанатомическая картина: серозный воспалительный отек слизистой оболочки гортани, слизистой желудка и кишечника с точечными кровоизлияниями, застойная гиперемия паренхиматозных органов, состояние зернистой дистрофии печени, сердца и почек, плохо свернувшаяся кровь.
Для исследований был отобран патологический материал: часть печени, желудок с содержимым, почка.
Исследования проводились по общетоксикологическим показателям. При анализе на алкалоиды была получена положительная реакция с групповым реактивом Драгендорфа. Это послужило отправной точкой для исследования на изониазид (тубазид).
Самый простой (химический) способ обнаружения изониазида (всех производных гидразин изоникотиновой кислоты) – реакция с водным раствором ванадата аммония (концентрация 1–2 %) – желто-коричневое окрашивание, значительно бледнеющее в течение 5–10 мин [1, 11].
Необходимо отметить, что групповая реакция с реактивом Драгендорфа не является специфической, подобную реакцию могут дать и другие лекарственные препараты (но-шпа, папаверин), поэтому вопрос об идентификации препарата достаточно актуален.
Мочу исследовали на содержание тубазида напрямую; из крови предварительно получали сыворотку (осаждением белков трихлоруксусной кислотой, центрифугированием, предварительно нейтрализовав щелочью); таким же образом подготавливали содержимое желудка [11].
Для идентификации изониазида мы использовали метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинах «Сорбфил» или «Силуфол». Согласно методикам, рекомендуется использовать систему, состоящую из хлороформа, ацетона, дионилового эфира фталевой кислоты в соотношении 5:4:1. Однако на практике последний реактив обычно отсутствует. В этом случае предпочтительно использовать систему хлороформ-ацетон (9:1), при слабом разведении можно увеличить количество ацетона. На пластину наносили растворенный хлороформенный экстракт и рядом стандарт. Общее количество нанесенного образца составляет в среднем 0,02 мл. Ориентироваться на величину Rf не стоит, так как эта величина рассчитана на чистые вещества. Стандарт готовили путем растворения лекарственного препарата в подщелочном хлороформе.
Анализ проводили в присутствии свидетелей. Проявляющим реактивом является реактив Драгендорфа,  который проявляет препарат в виде красно-кирпичных пятен.
Для контроля использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием прибора «Милихром А-02». Для хроматологического анализа предварительно приготовили изолированную сухую щелочную вытяжку (методика определения алкалоидов в патологическом материале) с рн-9, затем проводили растворение пробы в ацетонитриле с последующим детектированием и измерением содержания изониазида. Процесс анализа пробы делится на 2 этапа: разделение пробы на составляющие компоненты, детектирование и измерения содержания вещества.
Результаты исследований и их обсуждение.

Использование прибора «Милихром А-02» оказалось незаменимым для идентификации и количественного определения изониазида. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии явилось высокоточным методом для определения изониазида.
Результаты, полученные нами при использовании ВЭЖХ, оказались более высокоточными. К основным рассматриваемым характеристикам ВЭЖХ следует отнести чувствительность и селективность, к достоинствам данного метода – экспрессность и экономичность.
Выводы
1. Процесс идентификации отравляющих веществ, в частности, изониазида, целесообразно разделить
методически на два этапа. Первый – скрининговый (указательный) – с проведением качественной реакции
с реактивом Драгендорфа и тонкослойной хроматографии в присутствии свидетеля. Второй – арбитражный
– с удалением всех (в идеале) ложноположительных результатов. Для этого следует использовать высоко-
эффективную жидкостную хроматографию с применением внутреннего стандарта.
2. Скрининговый метод обладает высокой производительностью, высоким уровнем чувствительности,
достаточно широким охватом классом токсичных соединений, но у него нет высокой специфичности. На этом
этапе можно получить минимум отрицательных ответов и максимум положительных, однако при этом на-
блюдается значительное число ложноположительных результатов.

 

3. Арбитражный метод чувствителен и селективен, обладает экспрессностью и экономичностью, что
позволяет уменьшить число ложноположительных результатов.
Литература
Антонов Б.И., Федотова В.И., Сухая Н.А. Лабораторные исследования в ветеринарии // Химико-
токсикологические методы. – М.: Агропромиздат, 1989. – С. 244–248.
В Донецке ежегодно с особой жестокостью мэрия убивает тысячи собак // Новости Донбасса. – 2010. –
№ 47.
Изониазид. Справочник лекарств РЛС: инструкция, применение и описание вещества Изониазид. – М.:
Агропромиздат, 2008. – С. 167–169.
Куцева Екатерина. Нет зоофашизму // Донецкий коммуникационный ресурс. – 2010. – № 49. – С. 2.
Лазарева Елена. Более 200 укушенных – это не предел? // Дружковка. – 2010. – № 20. – С. 3.
Перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных средств. Распоряжение Правительства
Российской Федерации от 30 декабря 2009 г. № 2135-p. – М., 2009.
Смирнова Елена. Численность бродячих собак в Донецкой области будут контролировать противоту-
беркулезными таблетками // Факты и комментарии. – 2003. – № 5. – С. 3.
Стрелис А.К., Фомина И.П., Дехнич А.В. Противотуберкулезные химиопрепараты // Практическое ру-
ководство по антиинфекционной химиотерапии. – Смоленск: НИИ антимикробной химиотерапии
СГМА, 2002. – С. 65–75.
Lorrie Boldrick Top 10 Human Medications That Poison Our Pets (англ.). – ASPCA: копия документа.
Sycheva T.P., Pavlova T.N., Shchukina M.N. (1972). «Synthesis of isoniazid from 4 – cyanopyridine». Phar-
maceutical Chemistry Journal 6 (11). – P. 696–698. DOI:10.1007/BF00771896.
Treatment of acute isoniazid overdose in dogs. ( англ.) / D. Villar, M.K. Knight, J. Holding [at el.] // Veterinary
& Human Toxicology. – 1995 Oct. – B. 37(5):473-7. – ISSN 0145 – 6296.

Источник: Вестник КрасГау 2012 № 2

 

Интересная информация? Поделись с друзьями!

Оставить комментарий

Вы должны войти на сайт чтобы оставить комментарий.

Powered by WordPress and ThemeMag

Всё об экологии в одном месте: Всероссийский Экологический Портал